稳定细胞系构建平台

奥浦迈提供CHO稳定细胞系构建技术服务,客户只需提供目的蛋白抗体序列或cDNA载体,我们提供从分子克隆到筛选到高表达稳定细胞系的完整服务。我们采用已得到验证的基因密码子优化方法,选择合适的CHO表达宿主细胞(CHO DG44、CHO-K1和CHO-S),构建包含目的基因的载体,转染选择的宿主细胞,通过优化的工艺流程进行克隆筛选,并在过程中监控表达蛋白抗体的质量指标,根据表达量和质量选择最优的稳定表达克隆。

 

我们的特点:

1. 采用符合国际监管机构要求的宿主细胞,表达体系经过验证;

2. 4-6个月从DNA到筛选出高表达克隆,抗体表达稳定性良好;

3. 构建过程主要节点检测蛋白抗体质量以指导克隆筛选;

4. 细胞系构建成本低,文件系统完整,来源可追溯;

5. 整合培养基平台和细胞培养工艺,大大提高先导克隆培养工艺优化效率。

 

细胞系构建流程

 

案例1:CHO DG44平台细胞系构建

CHO DG44平台细胞系构建过程中单克隆抗体滴度呈增长趋势。电转染后48小时取样检测抗体表达(ForteBio仪器);经过两轮MTX扩增后的库细胞进行批培养(B);先导克隆分别进行批培养(B)和流加培养(FB);在OPM培养基中流加培养(FB)。其中批培养(B)仅补加葡萄糖,批培养和流加培养表达的抗体滴度采用HPLC方法测定。

 

案例2:CHO-K1平台细胞系构建

CHO-K1平台细胞系构建过程中各阶段抗体滴度呈增长趋势。电转染后72小时取样检测抗体表达;筛选的Top Minipol进行批培养(B),经过LDC结合Cell Imaging筛选单克隆,对Top Clone进行批培养(B)和流加培养(FB)。其中培养基均为OPM商业化培养基,批培养(B)仅补加葡萄糖,流加培养(FB)使用OPM平台化工艺。

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